本法適用于采用環(huán)氧乙烷滅菌的藥包材中環(huán)氧乙烷殘留量的測定。

本法在一定溫度下，用水萃取試樣中所含環(huán)氧乙烷，用頂空氣相色譜法測定環(huán)氧乙烷的含量。

本法照氣相色譜法（通則0521）測定。

色譜柱 

可選用能滿足分離要求的毛細(xì)管柱。

系統(tǒng)適用性試驗

（1）用環(huán)氧乙烷峰計算，毛細(xì)管色譜柱的理論塔板數(shù)一般不低于5000。

（2）色譜圖中，環(huán)氧乙烷峰與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。

（3）對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得環(huán)氧乙烷峰面積的RSD應(yīng)不大于10%。

（4）儀器的檢出限或定量限應(yīng)不低于限度要求。

供試品溶液的制備

供試品溶液的制備應(yīng)在取樣后立即進(jìn)行。供試品溶液的制備方法為：

方法一：將試樣截為不超過5mm的碎塊，稱取1.0g放入20ml頂空瓶中，然后精密加入水5ml，立即密封。

方法二：對于容器類試樣，加入標(biāo)示裝量的水，在37℃±1℃條件下恒溫1小時得到供試品溶液。精密量取供試品溶液5ml，置20ml頂空瓶中，立即密封。

測定法

測定方法一般采用第一法；當(dāng)?shù)谝环y定結(jié)果不符合規(guī)定時，應(yīng)采用第二法進(jìn)行復(fù)驗或測定；當(dāng)存在干擾峰或不能判定是否為目標(biāo)物時，采用第三法對環(huán)氧乙烷進(jìn)行定性驗證。

第一法（外標(biāo)法）

色譜條件  固定液為(6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×1.4μm）或極性相近的其他等效色譜柱；柱溫起始溫度為50℃，保持10分鐘；進(jìn)樣口溫度為200℃；檢測器（FID）溫度為250℃；載氣流速1.5ml/min。

對照品溶液的制備  應(yīng)根據(jù)供試品溶液中環(huán)氧乙烷的實際殘留量確定對照品溶液濃度，通常對照品溶液的色譜峰面積不宜超過供試品溶液中對應(yīng)的色譜峰面積的2倍。取環(huán)氧乙烷對照品適量，用水逐步稀釋成所需濃度的對照品溶液。精密量取對照品溶液5ml，置20ml頂空瓶中，立即密封。

測定法  將對照品溶液和供試品溶液分別置于60℃±1℃的條件下平衡40分鐘。分別取1ml液上氣體注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖，測定環(huán)氧乙烷的峰面積。分別平行測定不少于2份對照品溶液和供試品溶液。按外標(biāo)法以峰面積計算供試品溶液中的環(huán)氧乙烷濃度，按下式計算試樣中的環(huán)氧乙烷殘留量。

供試品溶液制備方法一可按照下式計算：

式中  X為試樣中的環(huán)氧乙烷殘留量，μg/g；

      5為供試品溶液的體積，ml；

      c為供試品溶液中環(huán)氧乙烷的濃度，μg/ml；

      m為試樣的質(zhì)量，g。

供試品溶液制備方法二可按下式計算： 

式中  X為每件試樣中的環(huán)氧乙烷殘留量，μg；

      c為供試品溶液中環(huán)氧乙烷的濃度，μg/ml；

      V為試樣的標(biāo)示裝量，ml。

第二法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）

色譜條件  同第一法。

系列對照品溶液的制備  系列對照品溶液的濃度范圍應(yīng)包含供試品中殘留環(huán)氧乙烷的濃度。取環(huán)氧乙烷對照品適量，用水逐步稀釋成濃度為 0.4~20μg/ml的系列對照品溶液，應(yīng)不少于5個濃度點（必要時可根據(jù)供試品實際情況調(diào)整線性范圍），線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.995。精密量取系列對照品溶液各5ml，置20ml頂空瓶中，立即密封。

測定法  將系列對照品溶液和供試品溶液分別置于60℃±1℃的條件下平衡40分鐘。分別取1ml液上氣體注入氣相色譜儀中，測定環(huán)氧乙烷峰面積。分別平行測定不少于2份各系列對照品溶液和供試品溶液。以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，回歸計算標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得供試品溶液中環(huán)氧乙烷的濃度，按第一法中的公式計算供試品中的環(huán)氧乙烷殘留量。

第三法（氣質(zhì)聯(lián)用色譜法）

色譜條件 固定液為(6%)氰丙基苯基-(94%)二甲基聚硅氧烷的毛細(xì)管柱（60m×0.25mm×1.4μm）或極性相近的其他等效色譜柱；起始柱溫為35℃，保持10分鐘；以高純氦氣為載氣，流速為1.0ml/min；進(jìn)樣口溫度為200℃；檢測器為質(zhì)譜。

質(zhì)譜條件 離子源為電子轟擊源（EI）；電離強(qiáng)度為70eV；采用全掃描方式測定，掃描范圍為29~300m/z；溶劑切除時間為5分鐘。

對照品溶液的制備  對照品溶液的濃度應(yīng)能夠保證實現(xiàn)準(zhǔn)確定性。取環(huán)氧乙烷對照品適量，用水逐步稀釋成所需濃度的對照品溶液。精密量取上述對照品溶液5ml，置20ml頂空瓶中，立即密封，搖勻。

測定法  將對照品溶液和供試品溶液，分別置于60℃±1℃的條件下平衡40分鐘。分別取1ml液上氣體注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，記錄質(zhì)譜圖，所得質(zhì)譜圖與NIST譜庫中的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖進(jìn)行比對，同時結(jié)合與對照品保留時間的一致性，定性判斷是否為環(huán)氧乙烷。

【附注】（1）供試品溶液制備時應(yīng)優(yōu)先取試樣中環(huán)氧乙烷殘留量較大的部分，如高分子材料。一般情況下，金屬、玻璃等環(huán)氧乙烷殘留量較小。

（2） 測定法中如采用手動進(jìn)樣，進(jìn)樣器應(yīng)預(yù)熱至與對照品溶液和供試品溶液相同溫度。

（3）采用第三法時，由于定性需要，必要時可適當(dāng)加大試樣取樣量。

（4）所用色譜條件應(yīng)使試樣中的雜質(zhì)和環(huán)氧乙烷完全分開，如應(yīng)能保證環(huán)氧乙烷與乙醛實現(xiàn)完全分離。

起草單位：山東省醫(yī)療器械和藥品包裝檢驗研究院           聯(lián)系電話：0531-82682912

參與單位：上海市食品藥品包裝材料測試所、深圳市食品藥品檢驗研究院

藥包材環(huán)氧乙烷測定法起草說明

一、制修訂的目的意義

環(huán)氧乙烷是一種可刺激體表并引起強(qiáng)烈反應(yīng)的易燃性氣體，能對體內(nèi)的多個器官系統(tǒng)產(chǎn)生損害。1994年國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）將其劃分為人類致癌物質(zhì)（一類）。

二、參考標(biāo)準(zhǔn)

YBB00242005-2015環(huán)氧乙烷殘留量測定法。

三、 需重點說明的問題

環(huán)氧乙烷在藥包材中的使用主要是作為滅菌劑，乙醛則是藥包材中聚對苯二甲酸乙二醇酯（PET）材料的分解產(chǎn)生，二者可能同時存在于同一產(chǎn)品中。由于乙醛與環(huán)氧乙烷二者極性相似，不容易分離，故根據(jù)二者的分離情況對色譜柱進(jìn)行了考察，下述色譜柱可實現(xiàn)環(huán)氧乙烷和乙醛完全分離，即中等極性色譜柱，固定相一般為(6%)氰丙基苯-(94%)二甲基硅氧烷，如DB-624 (30m×0.25mm×1.4μm)、DB-VRX (30m×0.25mm×1.4μm)。

容器類樣品的供試品溶液制備方法引用了YBB00112004-2015預(yù)灌封注射器組合件（帶注射針）中的方法。

環(huán)氧乙烷標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)選用市售有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液的溶劑宜為有機(jī)溶劑。

與YBB00242005 環(huán)氧乙烷殘留量測定法相比增加了第三法（氣質(zhì)聯(lián)用色譜法），以對環(huán)氧乙烷進(jìn)行定性驗證?；谠囼烌炞C，本標(biāo)準(zhǔn)對YBB00242005 環(huán)氧乙烷殘留量測定法中的色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，給出了供參考的色譜條件。

本標(biāo)準(zhǔn)為方法標(biāo)準(zhǔn)，具體限度要求，參見相關(guān)通則。

四、 主要意見反饋及處理情況

1. 建議將適用于本測定法的常用品牌的毛細(xì)管柱生產(chǎn)廠家、型號，在表述中進(jìn)行舉例。

回復(fù)：部分采納。已在色譜條件部分增加色譜柱的相關(guān)描述。

2. 方法中“分別平行測定不少于2份對照品溶液和供試品溶液”，平行樣的結(jié)果是否取平均值，是否應(yīng)做文字更改“分別平行測定不少于2份對照品溶液和供試品溶液，結(jié)果取平均值”

回復(fù)：未采納。由于不同試樣間的環(huán)氧乙烷殘留量存在差異性，因此本標(biāo)準(zhǔn)未規(guī)定取平均值作為測定結(jié)果。

3. 測定法（第一法）：建議明確對照品溶液應(yīng)連續(xù)進(jìn)樣不少于3次，所得待測物峰面積的RSD應(yīng)不大于10% 。

回復(fù)：部分采納。已在系統(tǒng)適用性部分增加相關(guān)描述“對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，所得環(huán)氧乙烷峰面積的RSD應(yīng)不大于10%。”

4. 測定法（第二法）：建議增加對標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)大小進(jìn)行規(guī)定，如:r在0.99以上。

回復(fù)：部分采納，已修改為“線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.995”。