ICH協(xié)調(diào)指導(dǎo)原則

來源于人或動物細胞系生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評價

Q5A（R2）

ICH共識指導(dǎo)原則

目錄

1. 簡介 8

2. 潛在的病毒污染源 10

2.1 主細胞庫可能存在的病毒

2.2 生產(chǎn)過程中可能引入的外源病毒

3. 細胞系檢定：病毒檢測

3.1 對主細胞庫、工作細胞庫及達到體外細胞傳代限次的生產(chǎn)用細胞進行病毒檢測

3.1.1 主細胞庫

3.1.2 工作細胞庫

3.1.3 達到體外細胞傳代限次的生產(chǎn)用細胞

3.2 對病毒檢測和鑒別方法的建議

3.2.1 逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測

3.2.2 體外細胞培養(yǎng)感染性試驗

3.2.3 體內(nèi)檢測

3.2.4 特異性病毒檢測

3.2.5 分子生物學(xué)方法 20

3.3 細胞系的可接受性

4. 未加工收獲液的病毒檢測

5. 對純化后產(chǎn)品進行病毒清除研究和病毒檢測的依據(jù)和行動計劃

6. 病毒清除工藝的評價和表征

6.1 用于評價和表征病毒清除的病毒選擇 30

6.1.1 相關(guān)病毒和模型病毒 30

6.1.2 其他考慮

6.2 病毒清除評價和表征的設(shè)計和影響

6.2.1 設(shè)施和人員

6.2.2 生產(chǎn)工藝的縮小模型

6.2.3 漸進式病毒清除分析

6.2.4 確定物理去除或滅活

6.2.5 滅活評估

6.2.6 層析柱的功能和再生

6.2.7 特別注意事項

6.3 病毒清除研究的說明

6.4 病毒清除研究的局限性 40

6.5 統(tǒng)計 41

6.6 應(yīng)用先驗知識評價病毒清除情況 41

6.7 病毒清除的再評價

7. 連續(xù)制造的考慮要點

7.1 連續(xù)制造中的病毒安全性

7.2 連續(xù)制造中病毒清除的一般考慮

7.3 連續(xù)制造中病毒清除的特殊考慮

7.3.1 與較長的細胞培養(yǎng)時間相關(guān)的潛在風(fēng)險

7.3.2 病毒清除研究方法

8. 總結(jié)

9. 術(shù)語表

10. 參考文獻 54

附件1：病毒清除研究用病毒的選擇

1.1 實用的“模型”病毒舉例

1.2 已用于病毒清除研究的病毒舉例

附件2：評估病毒和病毒下降因子的統(tǒng)計學(xué)考慮 62

附件3：確定病毒清除研究中下降因子的計算 64

附件4：每劑量病毒顆粒的估算 65

附件5：應(yīng)用先驗知識（包括內(nèi)部經(jīng)驗）以減少特定產(chǎn)品驗證工作的舉例 67

5.1 簡介 67

5.2 溶劑/去污劑或單獨去污劑滅活 68

5.3 低pH孵育

5.4 病毒過濾 72

附件6：基因工程病毒載體和病毒載體衍生產(chǎn)品 76

6.1 簡介 76

6.2 病毒檢測 77

6.3 病毒清除 79

1. 簡介

本指導(dǎo)原則描述了生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評價（包括病毒清除和檢測），并概述了此類產(chǎn)品上市申請時應(yīng)提交的研究資料。生物技術(shù)產(chǎn)品包括生物治療藥物和來源于人或動物（例如，哺乳動物、鳥類、昆蟲）細胞系的特定生物制品。本文件所述“病毒”不包括非常規(guī)傳染性因子，如與哺乳動物朊病毒（如瘋牛?。?/span>BSE）、瘙癢?。?/span>scrapie））相關(guān)的傳染性因子。鼓勵申請人與相應(yīng)監(jiān)管機構(gòu)討論不在本指導(dǎo)原則范圍內(nèi)的與瘋牛病相關(guān)問題。

本指導(dǎo)原則涵蓋利用重組DNA技術(shù)并通過體外細胞培養(yǎng)生產(chǎn)的產(chǎn)品，如細胞因子、單克隆抗體（mAbs）和亞單位疫苗。本指導(dǎo)原則還適用于某些能夠開展病毒清除但不會對產(chǎn)品產(chǎn)生負面影響的特定基因工程病毒載體和病毒載體衍生產(chǎn)品（例如，病毒疫苗和基因治療產(chǎn)品）。此類產(chǎn)品可能包括病毒載體，如使用瞬時轉(zhuǎn)染或穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系、或使用重組病毒感染生產(chǎn)的腺相關(guān)病毒（AAV）。還包括病毒載體衍生產(chǎn)品，例如桿狀病毒表達的病毒樣顆粒（VLPs）、蛋白質(zhì)亞基和基于納米顆粒的蛋白質(zhì)疫苗和治療藥物。AAV基因治療載體包括依賴輔助病毒，如單純皰疹病毒或腺病毒，生產(chǎn)的產(chǎn)品。關(guān)于基因工程病毒載體和病毒載體衍生產(chǎn)品的具體指南見附件6。

滅活疫苗和含自我復(fù)制因子的減毒活疫苗不在本指導(dǎo)原則范圍內(nèi)。細胞治療不在本指導(dǎo)原則范圍內(nèi)，但相關(guān)原則可在適用的情況下參考使用（如生物起始原材料）。

由于污染風(fēng)險以及受到替代、減少和優(yōu)化（3R）動物使用的全球倡議的影響，不再鼓勵使用在腹水內(nèi)培養(yǎng)的雜交瘤細胞來生產(chǎn)原材料。此類情況，應(yīng)遵循本指南的原則，包括采用下一代測序（NGS） 代替體內(nèi)檢測。

病毒污染的風(fēng)險是所有來源于細胞系的生物技術(shù)產(chǎn)品所關(guān)注的問題，需要降低，因為這種污染在臨床上可產(chǎn)生嚴(yán)重的后果。這種風(fēng)險可能來自源細胞系（細胞基質(zhì)）本身的污染，也可能來自生產(chǎn)過程中偶然引入的外源病毒。然而，細胞系來源的生物技術(shù)產(chǎn)品既往尚未發(fā)生過傳播病毒的情況。這些產(chǎn)品的病毒安全性通過實行全面的病毒檢測程序和評估生產(chǎn)過程中實現(xiàn)的病毒去除和滅活得到切實保證，如下所述。應(yīng)用三條互補的原則控制生物技術(shù)產(chǎn)品的潛在病毒污染：

· 選擇和檢測細胞系以及其他原材料（包括培養(yǎng)基組分），以確保其不含非預(yù)期感染性病毒

· 評估生產(chǎn)工藝清除外源性和內(nèi)源性病毒的能力

· 在生產(chǎn)的適當(dāng)步驟對產(chǎn)品進行檢測，以確保產(chǎn)品未受感染性病毒的污染。

基因工程病毒載體和病毒載體衍生產(chǎn)品生產(chǎn)過程中使用的一些病毒清除步驟可能無法達到與重組蛋白相同的效果。在這種情況下，應(yīng)考慮實施進一步降低風(fēng)險的策略，如原材料的處理和廣泛的病毒檢測。

病毒檢測具有其局限性。例如由于統(tǒng)計原因，檢測低濃度病毒的能力取決于樣本量。因此，沒有單一的方法能夠確定產(chǎn)品的病毒安全性。多數(shù)情況下，要確保終產(chǎn)品中沒有感染性病毒，不能單憑是否能夠直接檢測到病毒而定，還需證明純化工藝能夠去除和/或滅活（清除）病毒。

在不同生產(chǎn)步驟中開展的病毒檢測的類型和程度以及病毒清除研究取決于多種因素，應(yīng)根據(jù)具體情況和步驟具體分析。應(yīng)考慮的因素包括：細胞系的來源、細胞庫表征和檢定程度、所測定病毒的性質(zhì)、培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)方法、設(shè)施和設(shè)備設(shè)計、細胞培養(yǎng)后病毒檢測結(jié)果、生產(chǎn)工藝清除病毒的能力和產(chǎn)品類型及其預(yù)期臨床用途。

應(yīng)根據(jù)特定產(chǎn)品及其生產(chǎn)工藝調(diào)整本指南推薦的方案。此外，還應(yīng)對用于確保病毒安全性的方法作出合理解釋并說明依據(jù)。除了提供詳細數(shù)據(jù)外，還應(yīng)提供一份病毒安全性評估的全面總結(jié)。該總結(jié)應(yīng)包含病毒安全性研究的各方面內(nèi)容和用于預(yù)防病毒污染的策略的概述。

來源：CDE