一、概述

（一）前言

干細胞是一類具有自我更新和多向分化潛能的細胞，在疾病治療方面具有應(yīng)用潛力。近年來，隨著干細胞技術(shù)的發(fā)展、認知的深入和經(jīng)驗的積累，干細胞治療已逐步成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一大熱點。為規(guī)范和指導(dǎo)人源干細胞產(chǎn)品（以下簡稱干細胞產(chǎn)品）非臨床研究和評價，在《細胞治療產(chǎn)品研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》《基因修飾細胞治療產(chǎn)品非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》基礎(chǔ)上，根據(jù)目前對干細胞產(chǎn)品的科學(xué)認識，制定本指導(dǎo)原則，提出對干細胞產(chǎn)品非臨床研究和評價的特殊考慮和要求。隨著技術(shù)的發(fā)展、認知程度的深入和相關(guān)研究數(shù)據(jù)的積累，本指導(dǎo)原則將不斷完善和適時更新。

（二）適用范圍

本指導(dǎo)原則主要為按照藥品管理相關(guān)法規(guī)進行研發(fā)和注冊申報的人源干細胞產(chǎn)品的非臨床研究提供技術(shù)指導(dǎo)。本指導(dǎo)原則中的人源干細胞產(chǎn)品是指起源于人的成體干細胞（adult stem cells，ASCs）、人胚干細胞（embryonicstem cells，ESCs）和誘導(dǎo)多能干細胞（induced pluripotent stemcells，iPSCs），經(jīng)過一系列涉及干細胞的體外操作（一般包括擴增、基因修飾、誘導(dǎo)分化、轉(zhuǎn)分化等）獲得的干細胞及其衍生細胞產(chǎn)品。

二、總體考慮

（一）研究目的

非臨床研究是藥物開發(fā)的重要環(huán)節(jié)。干細胞產(chǎn)品的有效成分是具有一定生物學(xué)功能且具有不同程度分化潛力的細胞，與常規(guī)治療藥物相比，其治療機制、體內(nèi)活性和毒性可能存在明顯差異，細胞與人體的相互作用也更具有種屬特異性，因此，與常規(guī)治療藥物相比，干細胞產(chǎn)品的非臨床研究具有其特殊性。干細胞產(chǎn)品非臨床研究的主要目的是：（1）對擬定的作用機制進行概念驗證，考察有效性潛力，明確其在擬定患者人群中使用的生物學(xué)合理性；（2）研究干細胞體內(nèi)命運和行為；（3）根據(jù)潛在風險因素，闡明毒性反應(yīng)特征，預(yù)測人體可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)，確定臨床監(jiān)測指標，為制定臨床風險控制措施提供參考信息。應(yīng)通過開展非臨床研究，收集用于獲益-風險評估的信息，以確定擬開發(fā)產(chǎn)品在目標患者人群中預(yù)期具有合理的、可接受的獲益-風險比，同時為臨床試驗的設(shè)計和風險控制策略的制定以及產(chǎn)品上市提供支持性依據(jù)。

（二）基本原則

1．具體情況

具體分析由于干細胞產(chǎn)品的物質(zhì)組成和作用機制與小分子藥物、大分子生物藥物不同，所以傳統(tǒng)、標準的非臨床研究試驗方法可能不完全適用于干細胞產(chǎn)品。干細胞產(chǎn)品種類多、差異大、情況復(fù)雜、風險程度不同，因此，不同產(chǎn)品所需的非臨床研究內(nèi)容和具體試驗設(shè)計應(yīng)遵循“具體情況具體分析”的原則。

2．GLP 要求

干細胞產(chǎn)品的非臨床安全性研究一般應(yīng)當在經(jīng)過藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）認證的機構(gòu)開展，并遵守GLP。當某些特殊情況下無法遵守 GLP 時，例如采用非常規(guī)動物模型、在概念驗證或生物分布試驗中整合安全性檢測指標、檢測某些特殊指標等，應(yīng)最大限度地按 GLP 原則進行試驗，確保試驗質(zhì)量和數(shù)據(jù)的完整性及可追溯性。

3．隨機、對照、重復(fù)

試驗應(yīng)遵循隨機、對照、重復(fù)的原則。

（三）制定非臨床研究策略時的重要關(guān)注點

1．非臨床研究考慮因素

干細胞具備自我更新和多向分化潛能，細胞類型多樣，細胞本身具備體內(nèi)存續(xù)、增殖和/或分化、細胞間相互作用等能力。由于細胞本身生物學(xué)特性、制備工藝的復(fù)雜性、給藥方式的多樣性等因素，各類型干細胞產(chǎn)品的風險程度也可能不同。在非臨床研究中需要考慮以下因素（包括但不限于）：細胞來源、生物學(xué)特性、作用機制；生產(chǎn)過程（如體外培養(yǎng)、純化、誘導(dǎo)分化、擴增、基因修飾/改造等）；終產(chǎn)品中不同分化階段細胞的數(shù)量/比例；終產(chǎn)品中可能殘留的非目的細胞（如未分化細胞、非預(yù)期分化細胞等）、非細胞成分（如雜質(zhì)、外源因子等）；臨床擬用人群、給藥方式、預(yù)期的藥理作用靶部位；細胞在受者體內(nèi)的遷移、定植、分化、存續(xù)等；細胞的免疫原性和受者對細胞的免疫反應(yīng)；成瘤性和致瘤性的風險等。此外，對于已有人體數(shù)據(jù)的干細胞產(chǎn)品，還可結(jié)合人體信息綜合評估預(yù)期的人體風險和獲益。涉及基因修飾的干細胞產(chǎn)品還需考慮以下因素（包括但不限于）：

（1）基因修飾的目的、方式、技術(shù)；

（2）基因轉(zhuǎn)導(dǎo)/編輯效率

（3）載體自身風險；

（4）基因修飾脫靶風險；

（5）基因修飾對細胞表型和生物學(xué)特性的影響；

（6）對于導(dǎo)入目的基因，還應(yīng)考慮目的基因的表達情況和表達產(chǎn)物的生物學(xué)作用。

2．受試物

非臨床研究所用受試物應(yīng)能代表臨床擬用樣品。體外、體內(nèi)非臨床研究所使用的樣品均應(yīng)符合相應(yīng)開發(fā)階段的質(zhì)量標準要求。若后續(xù)制備工藝發(fā)生變更，應(yīng)闡明非臨床研究用樣品與臨床試驗擬用樣品的異同及其對人體有效性和安全性的可能影響，必要時開展變更前后樣品的非臨床橋接研究。當無法采用臨床擬用產(chǎn)品進行動物試驗而采用動物源替代產(chǎn)品開展試驗時，動物源替代產(chǎn)品應(yīng)與臨床擬用產(chǎn)品采用相似的生產(chǎn)工藝，并對可能影響有效性和安全性的關(guān)鍵質(zhì)量參數(shù)進行對比研究，以評估替代產(chǎn)品與臨床擬用產(chǎn)品的相似性及其對非臨床數(shù)據(jù)預(yù)測性的影響。目前，對于不同種屬來源的干細胞之間的相似性的研究尚不充分，尚缺乏統(tǒng)一的相似性評價標準。因此，采用從動物源替代產(chǎn)品非臨床試驗中獲得的數(shù)據(jù)進行臨床轉(zhuǎn)化時，存在一定的不確定性。

3．動物種屬/模型選擇

應(yīng)盡可能選擇相關(guān)動物種屬/模型進行非臨床體內(nèi)研究。動物種屬/模型的選擇應(yīng)該具有科學(xué)合理的依據(jù)。選擇相關(guān)動物時需要考慮產(chǎn)品特性和臨床擬用情況，包括但不限于以下因素：

（1）動物對人源干細胞及其分化后細胞的生物學(xué)反應(yīng)與預(yù)期的人體反應(yīng)的相似性；

（2）動物對人源干細胞的免疫耐受性；

（3）動物的解剖學(xué)和病理生理學(xué)特征與擬定適應(yīng)癥人群的相似性；

（4）臨床擬用給藥途徑/給藥方式的可行性；

（5）涉及基因修飾的干細胞產(chǎn)品，還應(yīng)考慮動物對目的基因或基因表達產(chǎn)物的敏感性、表達產(chǎn)物在動物體內(nèi)的生物學(xué)效應(yīng)。

采用疾病動物模型開展的研究可以同時提供干細胞產(chǎn)品的藥理活性和毒性信息，也可以模擬臨床患者的病理生理狀態(tài)，因此，必要時可考慮采用疾病動物模型進行非臨床研究。免疫功能正常的動物給予人源干細胞后，可能出現(xiàn)免疫應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致細胞被過早或快速清除，此種情況下，可考慮采用免疫缺陷或免疫系統(tǒng)人源化的動物模型開展非臨床研究。免疫缺陷動物包括遺傳性免疫缺陷動物模型、經(jīng)免疫抑制劑/物理照射方法構(gòu)建的免疫抑制動物模型等，可根據(jù)情況進行合理選擇。需要關(guān)注的是，每種動物種屬/模型均有其優(yōu)點和不足，沒有一種動物種屬/模型可全面預(yù)測干細胞產(chǎn)品在患者人群中的有效性和安全性。因此，在選擇動物種屬/模型時，應(yīng)評估所采用的動物種屬/模型與人體的相關(guān)性和局限性。若有多種相關(guān)動物種屬/模型，且這些動物種屬/模型可提供互補的證據(jù)，建議采用多種動物種屬/模型開展研究。當缺少相關(guān)動物種屬/模型時，基于細胞和組織的模型（如二維或三維組織模型、類器官和微流體模型等）可能為非臨床有效性和安全性的評估提供有用的補充信息。同源動物模型（即在同一動物種屬中使用動物源替代產(chǎn)品來模擬人類細胞產(chǎn)品的動物模型）可能可以為概念驗證提供支持性信息，在無法采用臨床擬用產(chǎn)品進行動物試驗（應(yīng)提供依據(jù)）的情況下可以考慮采用。然而，由于動物干細胞和人類干細胞之間的差異性，從該模型獲得的研究數(shù)據(jù)在預(yù)測人體反應(yīng)方面存在不確定性，因此對該動物模型中獲得的數(shù)據(jù)應(yīng)進行謹慎分析。

4．給藥方式/途徑

非臨床研究中的給藥方式/途徑應(yīng)能最大程度模擬臨床擬用給藥方式/途徑。如果在動物試驗中采用其他的給藥方式/途徑，應(yīng)闡明其科學(xué)性和合理性依據(jù)。某些情況下，干細胞產(chǎn)品可能涉及干細胞產(chǎn)品以外的其他材料（如生物材料、細胞支架、特殊給藥設(shè)備等）的應(yīng)用，也可能與其他醫(yī)學(xué)干預(yù)措施聯(lián)合使用（如手術(shù)、組織提取操作、免疫抑制），這些材料或干預(yù)措施可能會與干細胞產(chǎn)品相互作用，且這些材料或干預(yù)措施之間也可能發(fā)生相互作用。此種情況下，非臨床研究應(yīng)盡可能模擬臨床給藥方案。

5．整合試驗

基于干細胞產(chǎn)品特點、相關(guān)動物種屬/模型的可獲得性，某些非臨床試驗可整合在其他試驗中進行。例如，如果可行且科學(xué)合理，在疾病動物模型的藥效學(xué)試驗中伴隨考察毒理學(xué)指標，將藥代動力學(xué)試驗整合至藥效學(xué)試驗和/或毒理學(xué)試驗中。整合試驗設(shè)計有助于闡明藥代動力學(xué)、藥效、毒性的相關(guān)性。

三、基本內(nèi)容

（一）藥理學(xué)研究/概念驗證

應(yīng)通過藥理學(xué)試驗闡述干細胞產(chǎn)品的可能作用機制以及在擬定患者人群中使用的生物學(xué)合理性。試驗設(shè)計應(yīng)考慮干細胞產(chǎn)品的作用機制、給藥方式、產(chǎn)品特性和存續(xù)時間等因素。干細胞產(chǎn)品的藥理學(xué)研究通常包括體外和體內(nèi)試驗。體外試驗應(yīng)對細胞的表型和功能特性進行研究，如細胞增殖能力、分化潛力、分泌能力以及其他生理功能活性等。若涉及基因修飾或其他改造，還應(yīng)研究這些修飾或改造對細胞生理、行為和功能活性的潛在影響。體內(nèi)試驗應(yīng)盡可能在與人類疾病相關(guān)的疾病動物模型中驗證細胞產(chǎn)品可發(fā)揮預(yù)期的藥理學(xué)作用。疾病動物模型和主要終點的選擇應(yīng)結(jié)合細胞的藥理學(xué)作用機制和擬用的患者人群綜合考慮。對于涉及組織再生/修復(fù)的產(chǎn)品，應(yīng)關(guān)注對長期效應(yīng)的評估。體外和體內(nèi)試驗應(yīng)足以全面驗證產(chǎn)品的設(shè)計理念。

（二）藥代動力學(xué)研究

干細胞產(chǎn)品的藥代動力學(xué)研究信息對提示其有效性和安全性至關(guān)重要。應(yīng)參考《細胞治療產(chǎn)品研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中對細胞治療產(chǎn)品藥代動力學(xué)的一般要求，采用相關(guān)動物種屬開展藥代動力學(xué)試驗，以闡明干細胞產(chǎn)品在體內(nèi)的命運和行為。根據(jù)產(chǎn)品特性，檢測與藥效和毒性相關(guān)的藥代動力學(xué)行為，如生物分布、遷移、定植、增殖、分化、存續(xù)性等。疾病動物模型可能對評估干細胞產(chǎn)品的分布特征更有意義，鼓勵在藥效學(xué)試驗中伴隨生物分布研究。生物分布試驗設(shè)計時應(yīng)考慮到干細胞的體內(nèi)命運是一個多步驟過程，應(yīng)動態(tài)觀察干細胞的生物分布特征，可采用的技術(shù)方法有影像技術(shù)、聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)、免疫組化技術(shù)、原位雜交技術(shù)等，試驗設(shè)計需要考慮技術(shù)方法的適用性和優(yōu)缺點。涉及基因修飾的干細胞產(chǎn)品還應(yīng)參考 ICH S12 指導(dǎo)原則對目的基因的存續(xù)、表達（部位、水平、持久性）以及表達產(chǎn)物的生物學(xué)活性進行必要的研究。

（三）非臨床安全性研究

在制定非臨床安全性研究策略時，除參考《細胞治療產(chǎn)品研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中對細胞治療產(chǎn)品的一般要求外，還應(yīng)根據(jù)每個產(chǎn)品的特點，按照基于風險的原則具體問題具體分析，除參考本指導(dǎo)原則“二、總體考慮”項下“1.非臨床研究考慮因素”小節(jié)內(nèi)容外，還應(yīng)考慮的因素包括已有的非臨床/臨床數(shù)據(jù)、類似產(chǎn)品的有效性和安全性信息等。

1．安全藥理學(xué)

干細胞及其分化的功能細胞和/或其分泌的活性物質(zhì)、處方中非細胞成分等可能會對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等產(chǎn)生影響。在首次臨床試驗前，應(yīng)結(jié)合細胞產(chǎn)品的特性、細胞在體內(nèi)的分布特征評估其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的潛在影響。經(jīng)評估存在安全性擔憂時，應(yīng)考慮進行安全藥理學(xué)試驗，若無法進行，應(yīng)說明理由。這些試驗可結(jié)合在一般毒理學(xué)試驗中，若結(jié)合進行，需按安全藥理學(xué)試驗的要求進行設(shè)計。在必要時，可能需要開展補充和追加的安全藥理學(xué)研究。

2．一般毒理學(xué)

一般毒理學(xué)試驗主要用于評價干細胞產(chǎn)品的全身毒性和局部毒性、急性毒性和長期毒性或延遲毒性、劑量和效應(yīng)關(guān)系等。應(yīng)基于干細胞產(chǎn)品的生物學(xué)特性、可能的風險因素和安全性擔憂，采用基于風險、科學(xué)導(dǎo)向的靈活設(shè)計方案。

2.1 動物種屬選擇

關(guān)于毒理學(xué)試驗動物種屬的選擇，應(yīng)基于干細胞產(chǎn)品的風險大小、相關(guān)動物種屬/模型的可獲得性等因素綜合分析，總體目標是盡可能最大程度地闡明干細胞產(chǎn)品的安全性特征，為人體安全性提供有價值的預(yù)測信息。在可行的情況下，盡量考慮獲得兩種相關(guān)動物種屬的非臨床安全性信息；若不可行，需提供不可行的科學(xué)合理的依據(jù)。在某些情況下，基于品種的特點和對同類品種已有的安全性認識，一種動物種屬的毒理學(xué)試驗可能也是能接受的，但是應(yīng)提供科學(xué)合理性依據(jù)。動物種屬選擇的考慮因素參考本指導(dǎo)原則“二、總體考慮”項下“3.動物種屬/模型選擇”的建議。通常在一般毒性試驗開展前，應(yīng)探索與人體相關(guān)的潛在動物種屬/模型，基于充分的科學(xué)合理的信息，來支持動物種屬的選擇。通常采用雌雄兩種性別動物進行試驗。若采用單性別進行試驗，應(yīng)提供合理性依據(jù)。

2.2 分組和劑量設(shè)計

通常情況下，一般毒理學(xué)試驗中的給藥劑量應(yīng)包括多個劑量。合適的劑量間距，有助于評估毒性反應(yīng)-劑量關(guān)系的陡峭程度和 I 期臨床劑量遞增方案的設(shè)計。高劑量一般期望獲得明顯毒性反應(yīng)的相關(guān)信息，通常為藥效學(xué)最高劑量的一定倍數(shù)或擬推薦臨床最高劑量的一定倍數(shù)。最高劑量的設(shè)置可能會受到動物模型、給藥部位容量/大小、給藥途徑和制劑最高濃度等限制，可選擇最大可行劑量作為最高劑量。需結(jié)合處方組成和生產(chǎn)工藝，設(shè)置合適的對照組，以幫助確定試驗中發(fā)現(xiàn)的不良結(jié)果是否與受試物相關(guān)。

2.3 給藥方案

試驗中的給藥方案應(yīng)最大程度地模擬臨床擬用給藥方案，給藥途徑、給藥頻率和試驗期限應(yīng)能反映臨床使用情況。結(jié)合產(chǎn)品的預(yù)期存續(xù)特點和在動物中的藥代動力學(xué)特征設(shè)置合適的給藥次數(shù)、給藥頻率和試驗期限，并確保試驗中動物暴露于受試物和/或表達產(chǎn)物。

2.4 檢測指標

對于在體內(nèi)可能長期存續(xù)發(fā)揮作用的產(chǎn)品，建議一般毒理學(xué)試驗中設(shè)置多個剖檢時間點，以評估可能的急性期反應(yīng)和長期存續(xù)導(dǎo)致的長期毒性或延遲毒性。除常規(guī)觀察指標外，還需結(jié)合產(chǎn)品特點和風險，選擇合適的檢測指標。對于系統(tǒng)給藥的干細胞產(chǎn)品，應(yīng)關(guān)注異位組織形成的風險。當形成異位組織時，應(yīng)考慮其類型和發(fā)生率、解剖位置和起源。必要時應(yīng)采用免疫組化等方法對異位組織的細胞來源進行分析評估。

3．成瘤性和致瘤性

干細胞產(chǎn)品、干細胞產(chǎn)品中殘留的未分化細胞或轉(zhuǎn)化細胞可能會存在致癌性風險，致癌性是干細胞產(chǎn)品安全性評價的重點關(guān)注內(nèi)容，但是標準的嚙齒類動物致癌性試驗不適用于干細胞產(chǎn)品，需采用成瘤性和致瘤性試驗評估干細胞產(chǎn)品的致癌性潛力。成瘤性和致瘤性試驗應(yīng)采用臨床擬用產(chǎn)品進行試驗，不可采用動物源替代產(chǎn)品。

3.1 成瘤性（Tumorigenicity）風險

干細胞產(chǎn)品的成瘤性系指動物接種細胞后由接種細胞本身形成腫瘤的可能性，即接種的細胞自身形成腫瘤的可能性。干細胞產(chǎn)品的成瘤性風險來源包括但不限于：終產(chǎn)品、終產(chǎn)品中殘留的未分化細胞、終產(chǎn)品中其它未知的未分化完全細胞具有較高的增殖和分化能力，在體內(nèi)可能具有形成腫瘤的風險；基因修飾、長時間體外培養(yǎng)等操作可能導(dǎo)致細胞的基因、表觀遺傳學(xué)改變，使細胞可能具有轉(zhuǎn)化為腫瘤細胞的風險。干細胞產(chǎn)品的成瘤性風險大小取決于細胞的來源、表型、分化狀態(tài)、增殖能力、體外培養(yǎng)條件、體外處理方式/程度、注射部位和注射途徑等。多能干細胞（如 iPSCs 和 ESCs）與成體干細胞[如間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)、造血干細胞(hematopoietic stem cells, HSCs)]在腫瘤形成的固有風險方面存在明顯差異。正常的成體干細胞通常沒有固有的成瘤性，但如果在體外培養(yǎng)過程中發(fā)生轉(zhuǎn)化，它們在體內(nèi)也有可能形成腫瘤。多能干細胞具有形成畸胎瘤的固有特征，當在敏感解剖部位（例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)）形成畸胎瘤時，會引起安全性擔憂。未分化的多能干細胞也可能產(chǎn)生惡性畸胎瘤。

3.2 致瘤性（Oncogenicity）風險

干細胞產(chǎn)品的致瘤性系指終產(chǎn)品通過臨床擬用途徑給予受者（受試者/患者）后，導(dǎo)致受者形成腫瘤的可能性，即終產(chǎn)品促使正常細胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤細胞的可能性。

3.3 成瘤性和致瘤性非臨床研究策略

在開展首次臨床試驗前，應(yīng)基于干細胞產(chǎn)品的生物學(xué)特性（細胞成瘤的可能性）、體外處理方式/程度（培養(yǎng)傳代次數(shù)、基因修飾等）、細胞存續(xù)特點、臨床擬用給藥途徑等因素，評估干細胞產(chǎn)品的成瘤性和/或致瘤性風險。目前評價干細胞產(chǎn)品成瘤性的體外試驗包括但不限于：核型分析（用于評估遺傳穩(wěn)定性）、軟瓊脂克隆形成試驗（用于檢測轉(zhuǎn)化細胞）、端粒酶活性檢測（用于評估端粒酶活性水平）、數(shù)字 PCR（用于檢測未分化的 iPSCs 或 ESCs）等。可根據(jù)產(chǎn)品特點選擇合適的體外試驗方法。動物成瘤性和致瘤性試驗是干細胞產(chǎn)品致癌性潛力評估的重要內(nèi)容，但是應(yīng)認識到其在相關(guān)動物模型選擇及臨床預(yù)測價值方面尚存在局限性。設(shè)計體內(nèi)成瘤性和致瘤性試驗時，干細胞產(chǎn)品應(yīng)能在所選擇的動物模型中存活足夠長的時間以評價腫瘤形成的潛力，因此試驗中需伴隨評估植入細胞的存續(xù)情況。試驗應(yīng)設(shè)計合適的對照（如未分化細胞、部分分化細胞或陽性對照、溶媒對照等）以確立實驗系統(tǒng)的敏感性和可靠性；設(shè)置合適的動物數(shù)量，使得足以對結(jié)果進行科學(xué)分析；應(yīng)包含一個最大可行劑量；應(yīng)至少包含臨床擬用給藥途徑，以確保可將細胞產(chǎn)品遞送到臨床擬用靶部位（除下文所述在有合理依據(jù)時體內(nèi)成瘤性試驗可采用敏感給藥途徑外）；試驗期限應(yīng)足以觀察到腫瘤形成。（注釋 1）對于成瘤性和致瘤性風險較低的成體干細胞產(chǎn)品，通常應(yīng)在首次臨床試驗前至少完成體外成瘤性評價；對于擬用于非晚期腫瘤適應(yīng)癥且風險較低的干細胞產(chǎn)品，通常在上市前完成體內(nèi)成瘤性和/或致瘤性試驗。對于成瘤性和/或致瘤性風險較高的干細胞產(chǎn)品（例如多能干細胞產(chǎn)品、其他分化程度較低的干細胞產(chǎn)品、藥學(xué)和/或已有非臨床研究提示風險較高的產(chǎn)品等），在首次臨床試驗前，應(yīng)完成體外成瘤性評價、臨床給藥途徑或敏感給藥途徑（如皮下注射、睪丸注射、肌腱注射、脊髓內(nèi)注射等，應(yīng)有合理依據(jù)）的體內(nèi)成瘤性試驗；若成瘤性試驗出現(xiàn)陽性結(jié)果，或者一般毒理學(xué)試驗中發(fā)現(xiàn)受者來源的癌前病變、可疑癌變等，首次臨床試驗前還應(yīng)完成臨床給藥途徑的致瘤性試驗。若成瘤性試驗結(jié)果為陰性，上市前完成臨床給藥途徑的致瘤性試驗。

當在動物成瘤性和/或致瘤性試驗中觀察到腫瘤發(fā)生時，需進行腫瘤細胞的種屬來源分析，以明確其來自于接種的干細胞產(chǎn)品還是來自于受者，分析屬于成瘤性還是致瘤性?？紤]到非臨床評價方法在預(yù)測干細胞產(chǎn)品成瘤性和致瘤性風險方面的局限性，需在臨床試驗中對受試者進行長期隨訪，關(guān)注腫瘤形成風險。對于擬用于腫瘤患者的人源干細胞產(chǎn)品，建議結(jié)合產(chǎn)品特性評估促進腫瘤進展的風險，必要時開展促瘤性試驗。

4．免疫毒性和免疫原性

干細胞產(chǎn)品需關(guān)注其誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫毒性，需采用合適的方法開展免疫毒性研究。在非臨床研究階段，可根據(jù)產(chǎn)品的特性和風險評估考慮是否開展干細胞產(chǎn)品的免疫原性研究。對于涉及基因修飾的干細胞產(chǎn)品，其表達的蛋白質(zhì)與天然產(chǎn)物相比結(jié)構(gòu)可能發(fā)生改變，或基因修飾可能產(chǎn)生非預(yù)期的肽/蛋白質(zhì)等，需評價免疫原性。可開展免疫原性發(fā)生機制/影響因素相關(guān)的體外研究，尤其當體內(nèi)免疫原性研究無法開展時（注釋 2）。

5．遺傳毒性

干細胞產(chǎn)品通常不需要進行標準組合的遺傳毒性試驗。如果終產(chǎn)品中的非細胞成分與 DNA 或其他遺傳物質(zhì)存在直接的相互作用，需評估其遺傳毒性風險，必要時開展試驗。對于涉及基因修飾的干細胞產(chǎn)品，需參考《基因修飾細胞治療產(chǎn)品非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》進行基因插入突變、基因編輯脫靶等風險評估。

6．生殖毒性

干細胞產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性、作用機制、臨床適應(yīng)癥和臨床擬用人群、一般毒理學(xué)試驗中的發(fā)現(xiàn)、生物分布特征等信息評估潛在的生殖和發(fā)育毒性風險。干細胞產(chǎn)品生殖毒性試驗的研究策略和風險評估可參考相關(guān)指導(dǎo)原則。

7．制劑安全性

應(yīng)根據(jù)干細胞產(chǎn)品的特點與臨床應(yīng)用情況考慮開展終產(chǎn)品制劑的刺激性、溶血性試驗。

8．其他

目前，干細胞產(chǎn)品的細胞來源、生產(chǎn)工藝、適應(yīng)癥定位、臨床應(yīng)用情況等方面存在較大的多樣性，必要時，應(yīng)基于產(chǎn)品特點及風險考慮開展或追加其他試驗。

四、注釋

注釋 1：對于干細胞產(chǎn)品的成瘤性和致瘤性試驗，目前尚無國際公認的試驗方法，尚需不斷積累經(jīng)驗。但是，成瘤性和致瘤性試驗的目的是為了提示干細胞產(chǎn)品的致癌性潛力，試驗設(shè)計應(yīng)達到能夠敏感地檢測到潛在的成瘤性和致瘤性的目標。關(guān)于成瘤性、致瘤性試驗的試驗期限，基于試驗?zāi)康?、動物模型壽命、不同給藥途徑下腫瘤發(fā)生的敏感程度等因素考慮，基于現(xiàn)有的認知，建議靜脈給藥途徑的成瘤性和致瘤性試驗的觀察期限不短于 6 個月，若采用敏感的其他給藥途徑進行成瘤性試驗，建議觀察期限不短于 4 個月；但在可行的情況下延長觀察期限可能更有利于成瘤性和致瘤性評價。

注釋 2：非臨床免疫原性研究通常指體內(nèi)研究，如采用免疫功能正常的動物給予干細胞產(chǎn)品后檢測免疫原性，通?？砂殡S在一般毒理學(xué)試驗中開展。針對干細胞產(chǎn)品，有文獻報道與免疫原性發(fā)生機制/影響因素有關(guān)的體外研究方法，例如檢測干細胞表面的 MHCⅠ類和 MCHⅡ類分子、共刺激分子的表達情況，混合淋巴細胞共培養(yǎng)試驗等，這些試驗對預(yù)測和評估人體免疫原性風險也有一定參考價值。但是，這些方法尚處于研究中，尚未形成公認的方法，需繼續(xù)積累經(jīng)驗。

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來源：CDE

原文下載：人源干細胞產(chǎn)品非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則.pdf