本品由 SN-甘油-3-磷酸膽堿與油酸反應、純化制備而得。按無水物計算，含二油酰磷脂酰膽堿（C44H84NO8P）應為 98.0%~102.0%。

【性狀】本品為白色或類白色塊狀物。

過氧化值 本品的過氧化值（通則 0713）應不大于 5。

【鑒別】在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。

【檢查】有關物質(zhì) 取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每 1ml 中含 10mg 的溶液，作為供試品溶液。

取油酰磷脂酰膽堿（LOPC）、油酸與二油酰磷脂酰膽堿（DOPC）對照品各適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每 1ml 中分別含 100μg、50μg、10μg 的混合溶液，作為對照品溶液（1）~（3）。

其中對照品溶液（3）作為靈敏度溶液。

另取生育酚對照品適量，加對照品溶液（1）溶解并稀釋制成每 1ml 中含 100μg 的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。

照高效液相色譜法（通則 0512）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑（推薦選用4.6×250mm，5μm，300? 色譜柱），流動相 A 為 0.05%甲酸水溶液，流動相 B 為甲醇；柱溫為 35℃；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測；按下表進行梯度洗脫。

取系統(tǒng)適用性溶液 20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，出峰順序依次為 LOPC、油酸、生育酚和 DOPC，LOPC 和油酸之間的分離度不得低于 5.0，理論板數(shù)按 DOPC 峰計算應不低于 3000。

精密量取靈敏度溶液 20μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，LOPC 和油酸信噪比不得小于10。

再精密量取對照品溶液（1）~（3）各 20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度的對數(shù)值與相應峰面積的對數(shù)值計算回歸方程，相關系數(shù)（r）應不小于 0.99。

精密量取供試品溶液 20μ1 注入液相色譜儀，用回歸方程計算有關物質(zhì)的含量，其中其他雜質(zhì)用 DOPC 回歸方程計算。

除 RRT 0.9~1.1 之間的峰和生育酚外，供試品溶液色譜圖中 LOPC 相鄰異構體峰面積應合并計算，含油酰磷脂酰膽堿（LOPC）不得過 0.5%，油酸不得過 0.3%，其他單個雜質(zhì)不得過0.3%，有關物質(zhì)總量（各雜質(zhì)之和）不得過 2.0%。 

生育酚 取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每 1ml 中含 10mg 的溶液，作為供試品溶液。

另取生育酚對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每 1ml 中約含 10μg 的溶液，作為對照品溶液。

照含量測定項下的色譜條件，檢測波長為 292nm，精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算，含生育酚不得過 0.1%。

油酸純度 取本品約 40mg，置 50ml 回流瓶中，加 0.5mol/L 氫氧化鈉甲醇溶液 4ml，在水浴中加熱回流 20 分鐘，放冷，加 14%三氟化硼甲醇溶液 5ml，再在水浴中加熱回流 2 分鐘，放冷，加異辛烷 4ml，繼續(xù)在水浴中加熱回流 1 分鐘，放冷，加飽和氯化鈉溶液 10ml，搖勻，靜置使分層，取上層液，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，作為供試品溶液。

分別取硬脂酸甲酯、棕櫚酸甲酯和油酸甲酯適量，用異辛烷溶解并稀釋制成每 1ml 中各約含 0.1mg 的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。 

照氣相色譜法（通則 0521）試驗，用聚乙二醇（或極性相近）為固定相的毛細管色譜柱，起始溫度為 70℃，維持 2 分鐘，以每分鐘 5℃的速率升溫至 240℃，維持 25 分鐘；進樣口溫度為 220℃，檢測器溫度為 260℃。

精密量取系統(tǒng)適用性溶液 1μl 注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，棕櫚酸甲酯和硬脂酸甲酯峰相對于油酸甲酯峰的保留時間分別為 0.87 和 0.99，理論板數(shù)按油酸甲酯峰計算不低于 10000，各色譜峰間的分離度均應符合要求。

精密量取供試品溶液 1μl 注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法以峰面積計算油酸的含量，含油酸應不少于 98.0%。

游離脂肪酸 取本品 1.0g，置錐形瓶中，加乙醇-乙醚（1：1）（臨用前加酚酞指示液0.1ml，用 0.05mol/L 氫氧化鈉溶液滴定至微顯粉紅色）20ml，振搖使溶解，用氫氧化鈉滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液顯紅色，消耗氫氧化鈉滴定液（0.05mol/L）的體積不得過 0.4ml。

水分 取本品適量，照水分測定法（通則 0832 第一法 1）測定，含水分不得過 2.0%。

微生物限度 取本品 10g，依法檢查（通則 1105 與通則 1106），加 10g 聚山梨酯 80 溶解，加入 pH7.0 無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至 100ml，混合均勻，制成 1:10 供試液。

取 1:10 供試液 10ml，加入 90ml pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，均質(zhì)混勻，作為 1:100供試液。

取 1:100 的供試液 2ml，等量加入 2 皿（1ml/皿）中，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，合并計數(shù)，測定需氧菌總數(shù)；取 1:10 的供試液 1ml，加入平皿中，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，測定霉菌和酵母菌總數(shù)；取 1:10 供試液 10ml，加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基檢查大腸埃希菌；取本品 10g，加入 200ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中檢查沙門菌，依法測定。

每 1g 供試品中，需氧菌總數(shù)不得過 102cfu，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過 102cfu，不得檢出大腸埃希菌；每 10g 供試品中不得檢出沙門菌。

細菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查（通則 1143），每 1g 二油酰磷脂酰膽堿中含內(nèi)毒素的量應小于標示量。

【含量測定】照高效液相色譜法（通則 0512）測定。

用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相；柱溫為 35℃；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測。精密量取對照品溶液（每 1ml 中含二油酰磷脂酰膽堿 0.4mg）20μl，注入液相色譜儀，理論板數(shù)按二油酰磷脂酰膽堿峰計算不低于 2000，重復進樣 5 次，二油酰磷脂酰膽堿峰面積的相對標準偏差應不大于 2.0%。

取二油酰磷脂酰膽堿對照品適量，精密稱定，分別用甲醇溶解并定量稀釋制成每 1ml 中約含二油酰磷脂酰膽堿 0.3mg、0.4mg 和 0.5mg 的溶液，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液 20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度的對數(shù)值與相應的峰面積對數(shù)值計算回歸方程，相關系數(shù)（r）應不小于 0.99。

另取本品約 200mg，精密稱定，置 50ml 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5ml，加甲醇稀釋至 50ml，搖勻，作為供試品溶液，同法測定，用線性回歸方程計算，即得。

【類別】脂質(zhì)體膜材等。

【貯藏】遮光，密封，-20℃保存。

【標示】應標明每 1g 本品中含內(nèi)毒素的量應小于的標示量。

二油酰磷脂酰膽堿標準草案起草說明

一、結構式、CAS 號、分子式和分子量 參考國內(nèi)外相關品種規(guī)定。

二、性狀 外觀根據(jù)所收集樣品的實際情況擬定；溶解度基于安全性考慮，并根據(jù)各家企業(yè)內(nèi)控標準和所收集樣品實際測定結果擬定。過氧化值采用通則 0713 脂肪與脂肪油測定法。

三、鑒別 以含量測定項下結果為依據(jù)擬定。

四、有關物質(zhì)、生育酚 有關物質(zhì)主要關注共性降解雜質(zhì)油酰磷脂酰膽堿和油酸。色譜條件和限度均參考企業(yè)內(nèi)控標準和所收集樣品實際測定結果擬定。生育酚為本品使用的抗氧化劑，因其在有關物質(zhì)項下與其他雜質(zhì)響應差異，采用紫外檢測器，作為特定雜質(zhì)控制。

五、油酸純度 樣品前處理和限度參考企業(yè)內(nèi)控標準和所收集樣品實際測定結果擬定，氣相色譜條件參考通則 0713 脂肪與脂肪油測定法擬定。

六、游離脂肪酸、水分 游離脂肪酸參考藥用輔料油酸鈉擬定，水分參考各家企業(yè)內(nèi)控標準擬定。

七、微生物限度 參考通則 1107、指導原則 9202 以及各家企業(yè)內(nèi)控標準擬定。其中本品為油溶性化合物，需使用聚山梨酯 80 進行溶解。

八、細菌內(nèi)毒素 根據(jù)通則 1143 相關要求制訂。

九、含量測定 參考各企業(yè)內(nèi)控標準和所收集樣品實際測定結果擬定。

十、類別、貯藏、標示 均參考各家企業(yè)內(nèi)控標準以及樣品的實際結果擬定

來源：CDE

原文下載：二油酰磷脂酰膽堿藥用輔料標準草案公示稿.pdf