0721維生素A測定法

0721維生素A測定法是用紫外-可見分光光度法(通則0401)或高效液相色譜法(通則0512)測定維生素A及其制劑中維生素A的含量,以單位表示，每單位相當于全反式維生素A醋酸酯0.344ug或全反式維生素A醇0.3004g。

測定應(yīng)在半暗室中盡快進行。

第一法(紫外-可見分光光度法)

由干維生素A制劑中含有稀釋用油和維生素A原料藥中混有其他雜質(zhì)，采用紫外-可見分光光度法測得的吸光度不是維生素A獨有的吸收，在以下規(guī)定的條件下，非維生素A物質(zhì)的無關(guān)吸收所引入的誤差可以用校正公式校正，以便得到正確結(jié)果。

校正公式采用三點法，除其中一點是在吸收峰波長處測得外,其他兩點分別在吸收峰兩側(cè)的波長處測定,因此儀器波長應(yīng)準確,在測定前,應(yīng)對儀器波長進行校正。

測定法 取供試品適量,精密稱定，加環(huán)已烷溶解并定量稀釋制成每1m!中含9~15單位的溶液，照紫外-可見分光光度法(通則0401),測定其吸收峰的波長，并在下表所列各波長處測定吸光度,計算各吸光度與波長328nm處吸光度的比值和波長328nm處的E1% 值。

如果吸收峰波長在326~329nm之間，且所測得各波長吸光度比值不超過表中規(guī)定的+0.02可用下式計算含量:每1q供試品中含有的維生素A的

如果吸收峰波長在326~329nm之間，但所測得的各波長吸光度比值超過表中規(guī)定值的±0.02,應(yīng)按下式求出校正后的吸光度，然后再計算含量:

如果在328nm處的校正吸光度與未校正吸光度相差不超過+3.0%,則不用校正,仍以未經(jīng)校正的吸光度計算含量。

如果校正吸光度與未校正吸光度相差在-15%至-3%之間，則以校正吸光度計算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度的-15%至-3%的范圍,或者吸收峰波長不在326~329nm之間，則供試品須按下述方法測定。

另精密稱取供試品適量(約相當于維生素A總量500單位以上,重量不多于2g),置皂化瓶中，加乙醇30ml與50%氫氧化鉀溶液3ml,置水浴中煮沸回流30分鐘，冷卻后，自冷凝管頂端加水10ml沖洗冷凝管內(nèi)部管壁,將皂化波移至分液漏斗中(分波漏斗活塞涂以甘油淀粉潤滑劑),皂化瓶用水60~100m1分數(shù)次洗滌,洗液并入分液漏斗中,用不含過氧化物的乙醚振搖提取4次,每次振搖約5分鐘,第一次60m1,以后各次40m，合并乙醚液，用水洗滌數(shù)次，每次約100ml,洗滌應(yīng)緩緩旋動,避免乳化，直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色,乙醚液用鋪有脫脂棉與無水硫酸鈉的濾器濾過，濾器用乙醚洗滌,洗液與乙醚液合并,置250m!量瓶中,用乙醚稀釋至刻度,搖勻;精密量取適量,置蒸發(fā)皿內(nèi),微溫揮去乙醚,迅速加異丙醇溶解并定量稀釋制成每1m|中含維生素A 9~15單位,照紫外-可見分光光度法(通則0401),在300nm、310nm、325nm與334nm四個波長處測定吸光度，并測定吸收峰的波長。吸收峰的波長應(yīng)在323~327nm之間，月300nm波長處的吸光度與325nm波長處的吸光度的比值應(yīng)不超過0.73，按下式計算校正吸光度:

如果校正吸光度在未校正吸光度的97%~103%之間，則仍以未經(jīng)校正的吸光度計算含量。

如果吸收峰的波長不在323~327nm之間，或300nm波長處的吸光度與325nm波長處的吸光度的比值超過0.73,則應(yīng)自上述皂化后的乙醚提取液250m|中,另精密量取適量(相當于維生素A 300~400單位),微溫揮去乙醚至約剩5m!,再在氨氣流下吹干,立即精密加入甲醇3m1,溶解后,采用維生素D測定法(通則0722)第二法項下的凈化用色譜系統(tǒng),精密量取溶解后溶液5001,注入液相色譜儀，分離并準確收集含有維生素A的流出液，在氮氣流下吹干，而后照上述方法自"迅速加異丙醇溶解"起，依法操作并計算含量。

第二法(高效液相色譜法)

本法適用于維生素A醋酸酯原料及其制劑中維生素A的含量測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用硅膠為填充劑;以正己烷-異丙醇(997:3)為流動相;檢測波長為325nm。取系統(tǒng)適用性試驗溶液10μ1,注入液相色譜儀，調(diào)整色譜系統(tǒng)，維生素A醋酸酯峰與其順式異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)大于3.0，精密量取對照品溶液10u1,注入波相色譜儀，連續(xù)進樣5次，主成分峰面積的相對標準偏差不得過3.0%。

系統(tǒng)適用性試驗溶液的制備 取維生素A對照品適量(約相當于維生素A醋酸酯300mg),置燒杯中,加入碘試液0.2ml,混勻,放置約10分鐘，定量轉(zhuǎn)移至200ml量瓶中，用正已烷稀釋至刻度,搖勻,精密量取1ml,置100ml量瓶中,用正已烷稀釋至刻度，搖勻。

測定法 精密稱取供試品適量(約相當于15mg維生素A醋酸酯),置100m|星瓶中,用正已烷稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml,置50ml量瓶中,用正已烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取維生素A對照品適量，同法制成對照品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各10y1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

【附注】(1)甘油淀粉潤滑劑 取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加熱至140℃,保持30分鐘并不斷攪拌，放冷，即得。

(2)不含過氧化物的乙醚 照麻醉乙醚項下的過氧化物檢査,如不符合規(guī)定,可用5%硫代硫酸鈉溶液振搖,靜置,分取乙醚層，再用水振搖洗滌1次，重蒸，棄去首尾5%部分，餾出的乙醚再檢査過氧化物，應(yīng)符合規(guī)定。

(3)若維生素A對照品中含有維生素A醋酸酯順式異構(gòu)體,則可直接以對照品溶液作為系統(tǒng)適用性溶液,不必再做破壞性實驗。