附件1

幽門螺桿菌耐藥基因突變檢測(cè)試劑

注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于采用實(shí)時(shí)熒光PCR法等分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)來自于人體的胃黏膜組織、糞便等樣本中的幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）耐藥基因進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，臨床主要用于幽門螺桿菌耐藥的輔助診斷。

申報(bào)產(chǎn)品的適用人群應(yīng)為幽門螺桿菌感染的確診患者。幽門螺桿菌感染的確診可以為尿素呼氣試驗(yàn)（UBT）、已上市幽門螺桿菌核酸或抗原檢測(cè)試劑、組織學(xué)檢測(cè)等。

幽門螺桿菌不同基因與表型的耐藥性之間符合率有較大差異，建議申請(qǐng)人選擇公認(rèn)符合率較高的抗生素耐藥基因作為靶標(biāo)，如克拉霉素耐藥基因、左氧氟沙星耐藥基因等。針對(duì)同一抗生素存在多個(gè)耐藥基因或耐藥突變位點(diǎn)的，申請(qǐng)人應(yīng)考慮申報(bào)產(chǎn)品對(duì)耐藥基因/位點(diǎn)的覆蓋率。如針對(duì)同一抗生素的不同耐藥基因位點(diǎn)的陽性結(jié)果對(duì)用藥判斷一致，申報(bào)產(chǎn)品可設(shè)計(jì)為不同基因單獨(dú)檢測(cè)，結(jié)果報(bào)告為具體突變類型；也可設(shè)計(jì)為不區(qū)分具體突變類型，結(jié)果報(bào)告為耐藥/敏感。建議在產(chǎn)品預(yù)期用途中明確，如：本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)來自幽門螺桿菌感染的確診患者的xx樣本中的yy耐藥基因突變，可檢測(cè)的突變類型包括xx基因zz突變，本產(chǎn)品可/不區(qū)分具體突變類型。針對(duì)耐藥基因的表述，應(yīng)滿足臨床通用的要求，如針對(duì)23S rRNA基因的A2142G、A2143G和A2142C點(diǎn)突變，針對(duì)gyrA 基因的A260T、C261A、T261G、G271A、G271T、A272G點(diǎn)突變等。 

幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)的產(chǎn)品不用于幽門螺桿菌感染的輔助診斷，此類產(chǎn)品不用于判斷樣本中幽門螺桿菌核酸的陰性或陽性。但在產(chǎn)品設(shè)計(jì)中，建議針對(duì)幽門螺桿菌保守核酸序列進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果作為幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)的質(zhì)控，只有當(dāng)該質(zhì)控陽性時(shí)才能進(jìn)行后續(xù)耐藥基因突變檢測(cè)結(jié)果的判定。

對(duì)于采用其他方法學(xué)或者其他樣本類型的幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)參照本指導(dǎo)原則，根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)適用部分進(jìn)行評(píng)價(jià)，并補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)。

本指導(dǎo)原則適用于幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和變更注冊(cè)的情形。本指導(dǎo)原則針對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求，同時(shí)建議參考《定性檢測(cè)試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》等適用的技術(shù)文件要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

    產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如幽門螺桿菌gyr A基因突變檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針法）。按照《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.注冊(cè)申請(qǐng)人還需提交產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1. 明確檢測(cè)位點(diǎn)的臨床意義，尤其是對(duì)于新突變位點(diǎn)，應(yīng)提交支持檢測(cè)位點(diǎn)臨床意義的行業(yè)認(rèn)可證據(jù)（如國(guó)內(nèi)相關(guān)指南或?qū)＜夜沧R(shí)）及支持性文獻(xiàn)等，詳述位點(diǎn)導(dǎo)致耐藥機(jī)制、氨基酸突變位點(diǎn)（如適用）、基因型與表型耐藥符合率，以及抗生素用藥背景以及中國(guó)人群數(shù)據(jù)等。

2. 檢驗(yàn)原理中詳細(xì)說明產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理及檢測(cè)流程，明確產(chǎn)品檢測(cè)靶基因及靶序列，需選擇保守性和特異性相對(duì)較高的基因和靶序列，同時(shí)還應(yīng)考慮擴(kuò)增效率。提供引物和探針的設(shè)計(jì)依據(jù)。提供核酸提取（手工和自動(dòng)提取方式應(yīng)分別明確）及檢測(cè)所用時(shí)間，提供不同適用機(jī)型的檢測(cè)通量（如適用）。

3. 預(yù)期用途需明確可檢測(cè)靶基因、對(duì)應(yīng)氨基酸突變（如有）及藥物、樣本類型、采樣部位、適用人群等。

4. 與已上市同類和/或前代產(chǎn)品進(jìn)行比較，比較內(nèi)容包括方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、樣本類型、采樣部位及采樣方式、檢測(cè)靶基因、組成成分、內(nèi)標(biāo)、質(zhì)控品、判讀規(guī)則、預(yù)期用途、適用人群、分析性能和臨床性能等方面。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

    按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，性能指標(biāo)一般包括陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、最低檢出限、精密度等，并提交三個(gè)不同批次符合產(chǎn)品技術(shù)要求的全項(xiàng)目檢驗(yàn)報(bào)告。提交資料應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》《醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定》等相關(guān)文件的要求。

2.分析性能研究

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，采用完整、確定的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析性能評(píng)估。

對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、研究方法、試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也需在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括試驗(yàn)地點(diǎn)、采用的試劑名稱、規(guī)格和批號(hào)，儀器名稱和型號(hào)，樣本類型和來源等。

分析性能評(píng)估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來源、樣本類型、樣本采集和處理方式、稀釋方式等。研究中采用的幽門螺桿菌耐藥基因突變陽性樣本，應(yīng)采用科學(xué)合理的方法確定其突變類型、突變比例/濃度水平，并提交具體的試驗(yàn)資料。分析性能評(píng)估用樣本一般應(yīng)為真實(shí)樣本（臨床樣本或培養(yǎng)菌株添加至陰性臨床樣本基質(zhì)），不建議采用質(zhì)粒等進(jìn)行分析性能評(píng)估，如涉及稀釋后檢測(cè)，應(yīng)采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)進(jìn)行稀釋。對(duì)于各項(xiàng)性能中采用的樣本，在下述各項(xiàng)性能研究資料中分別提供樣本信息列表。檢出限和包容性研究中所用樣本應(yīng)相互獨(dú)立。

針對(duì)適用的不同樣本類型分別進(jìn)行分析性能研究。

如申報(bào)產(chǎn)品用于不同適用機(jī)型，應(yīng)采用一個(gè)或多個(gè)機(jī)型，進(jìn)行充分的試劑分析性能建立研究，對(duì)于其他機(jī)型，應(yīng)分析各適用機(jī)型的工作原理、檢測(cè)方法、反應(yīng)條件控制、信號(hào)處理等，如基本相同，可基于風(fēng)險(xiǎn)分析對(duì)已建立的分析性能指標(biāo)進(jìn)行合理驗(yàn)證。所有適用機(jī)型驗(yàn)證的分析性能應(yīng)基本一致，如不同機(jī)型對(duì)某一檢測(cè)項(xiàng)目的某一分析性能存在差異，應(yīng)針對(duì)該差異采用不同機(jī)型進(jìn)行充分的分析性能建立研究。

如試劑包含不同的包裝規(guī)格，且不同規(guī)格間存在性能差異，需采用每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品進(jìn)行分析性能評(píng)估；如不同規(guī)格間不存在性能差異，需要詳細(xì)說明各規(guī)格間的差別及可能產(chǎn)生的影響，采用具有代表性的包裝規(guī)格進(jìn)行分析性能評(píng)估。

建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行詳細(xì)研究，包括采集后未經(jīng)處理的樣本，不同的樣本采集處理方法，加入不同裂解液/消化液/保存液的樣本（如適用），研究?jī)?nèi)容包括冷藏保存時(shí)間，冷凍保存時(shí)間，凍融次數(shù)等。

如產(chǎn)品適用不同的樣本類型，應(yīng)對(duì)每種樣本類型進(jìn)行穩(wěn)定性研究。

如核酸提取液可不立即進(jìn)行檢測(cè)，還需對(duì)核酸提取液的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。

2.2準(zhǔn)確度

2.2.1建議采用申報(bào)試劑與已明確型別和濃度樣本或與已上市產(chǎn)品或其他對(duì)比方法同時(shí)檢測(cè)臨床樣本比較耐藥基因與內(nèi)控基因檢測(cè)結(jié)果之間的一致性程度。研究應(yīng)納入一定數(shù)量的陰性和陽性樣本，并注意覆蓋每種突變類型。

2.2.2企業(yè)參考品驗(yàn)證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用至少三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.3精密度

精密度評(píng)價(jià)應(yīng)對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑（包括核酸提取/純化組分）本身外，還包括儀器、操作者、時(shí)間、地點(diǎn)、檢測(cè)輪次、試劑批次等，設(shè)計(jì)合理的精密度評(píng)價(jià)周期，并對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、不同操作者間和不同實(shí)驗(yàn)室間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

針對(duì)所有待測(cè)突變位點(diǎn)進(jìn)行精密度驗(yàn)證，并采用真實(shí)樣本進(jìn)行研究，同時(shí)至少采用3個(gè)濃度水平：

陰性樣本：待測(cè)物濃度低于最低檢測(cè)限，陰性檢出率應(yīng)為100%（n≥20）。

檢出限水平樣本：待測(cè)物濃度為檢出限濃度，陽性檢出率應(yīng)大于95%（n≥20）。

中/強(qiáng)陽性樣本：待測(cè)物濃度呈中度到強(qiáng)陽性，陽性檢出率為100%，且Ct值的CV≤5%（n≥20）。

2.5檢出限

  檢出限研究應(yīng)針對(duì)所有待測(cè)突變位點(diǎn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。使用已明確突變位點(diǎn)和濃度的培養(yǎng)菌株，采用與適用樣本類型一致的陰性基質(zhì)進(jìn)行系列稀釋，進(jìn)行最低檢測(cè)限的建立和驗(yàn)證。建議采用數(shù)字PCR、標(biāo)準(zhǔn)曲線（通過標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或構(gòu)建質(zhì)粒繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線）等方法進(jìn)行菌株核酸濃度/突變位點(diǎn)濃度的確認(rèn)，以copies/mL作為表示方式。明確每份菌株的來源、濃度、制備方法等信息。

2.5.1檢出限的建立

對(duì)于此類產(chǎn)品，擴(kuò)增反應(yīng)終體系中的耐藥突變序列所占百分率和總核酸濃度兩個(gè)因素對(duì)最低檢測(cè)限的影響較大，終體系中耐藥突變序列所占百分率越高、所含的總DNA量越多，則越容易檢出。因此，試劑盒最低檢測(cè)限評(píng)價(jià)主要考慮以下兩個(gè)方面。

100%耐藥比例下，耐藥菌株的最低檢測(cè)濃度

將幽門螺桿菌耐藥菌株用陰性基質(zhì)進(jìn)行系列稀釋，制備不同濃度的耐藥菌株樣本。分別對(duì)各濃度樣本進(jìn)行不少于20次的重復(fù)檢測(cè)，確定95%陽性檢出率水平，作為可檢測(cè)的最低耐藥菌株濃度。

不同菌株濃度、各種耐藥比例的最低檢測(cè)限

將不同濃度野生菌株和耐藥菌株進(jìn)行混合，調(diào)整野生和耐藥菌株的比例，得到含不同菌株濃度和各種耐藥比例的菌株混合液。對(duì)各份混合液進(jìn)行不少于20次的重復(fù)檢測(cè)，確定95%陽性檢出率水平下的濃度水平，即在固定的核酸濃度條件下，可以檢測(cè)到的最低的突變序列百分率。

2.5.2檢出限的驗(yàn)證

針對(duì)每種突變類型選擇不同于建立用臨床樣本，在已建立的檢出限水平進(jìn)行至少20次的重復(fù)檢測(cè)，應(yīng)滿足95%以上檢出率要求。

2.6包容性

根據(jù)試劑盒檢測(cè)范圍選擇具有時(shí)間和區(qū)域特征性的不同來源的臨床樣本或培養(yǎng)菌株。每種突變位點(diǎn)不少于5例樣本，研究應(yīng)包括檢出限和重復(fù)性的驗(yàn)證。

2.7分析特異性

2.7.1交叉反應(yīng)

2.7.1.1常見病原體交叉反應(yīng)

交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面：近緣菌、易引起相同或相似的臨床癥狀微生物、感染部位附近的定植菌等。糞便樣本建議考慮空腸彎曲菌、梭狀芽胞桿菌屬 、埃希菌屬、腸桿菌屬、腸球菌屬、變形桿菌屬、人感染其他螺桿菌 （如：海爾曼螺桿菌、鼠螺桿菌、豬螺桿菌等）；胃黏膜組織建議考慮空腸彎曲菌、變形桿菌屬、鏈球菌屬、葡萄球菌屬、雙歧桿菌屬、乳酸菌屬、人感染其他螺桿菌 （如：海爾曼螺桿菌、鼠螺桿菌、豬螺桿菌等）。

建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。通常，細(xì)菌感染的水平為10⁶ CFU/mL或更高，病毒為10⁵ PFU/mL或更高。

申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的微生物的來源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

2.7.1.2申報(bào)產(chǎn)品包含的不同耐藥突變位點(diǎn)之間的交叉反應(yīng)、申報(bào)產(chǎn)不包含的其它幽門螺桿菌耐藥基因突變的交叉反應(yīng)。

2.7.1.3其他耐藥細(xì)菌交叉：建議納入具有申報(bào)產(chǎn)品耐藥表型的其他細(xì)菌的交叉研究，如耐左氧氟沙星金黃色葡萄球菌等。

在交叉反應(yīng)研究中，申請(qǐng)人除關(guān)注對(duì)耐藥基因檢測(cè)結(jié)果的影響，還應(yīng)關(guān)注內(nèi)控基因的檢出變化。

2.7.2干擾研究

根據(jù)所采集樣本類型，針對(duì)可能存在的內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行試驗(yàn)，檢測(cè)至少包含臨界陽性水平在內(nèi)的幽門螺桿菌樣本。對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)比添加干擾物質(zhì)前后的 Ct 值差異。檢測(cè)的潛在干擾物包括樣本中的原有物質(zhì)及在樣本采集和處理期間引入的物質(zhì)。

2.7.2.1內(nèi)源性干擾

糞便樣本：白細(xì)胞、血紅蛋白、脂肪、腸道分泌物或粘液 、膳食纖維、多糖等。

胃黏膜組織：血液、粘蛋白、白細(xì)胞、膽汁、胃液、胃蛋白酶等。

2.7.2.2外源性干擾

抗菌藥物：克拉霉素、左氧氟沙星、阿莫西林、四環(huán)素、甲硝唑、呋喃唑酮等。

其他常見治療藥物：質(zhì)子泵抑制（如奧美拉唑、艾司奧美拉唑、雷貝拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、艾普拉唑等）、鉍劑（如枸櫞酸鉍、膠體果膠鉍、次水楊酸鉍等）、鉀離子競(jìng)爭(zhēng)性酸阻滯劑（如伏諾拉升、替戈拉生、凱普拉生等）、痔瘡膏、通便靈、鋁碳酸鎂、乳酸菌素和中成藥、促胃腸動(dòng)力藥（多潘立酮、莫沙必利等）、消化酶等。

益生菌：乳桿菌、雙歧桿菌、丁酸梭菌、枯草二聯(lián)桿菌，地衣芽孢桿菌等。

胃黏膜組織樣本采集和處理期間引入的物質(zhì)（如去泡劑：二甲硅油、西甲硅油等）。

2.7.2.3競(jìng)爭(zhēng)性干擾

臨床上存在多種耐藥基因突變的情況，應(yīng)考慮評(píng)價(jià)高濃度分析物對(duì)低濃度分析物檢測(cè)的影響。競(jìng)爭(zhēng)性感染的突變位點(diǎn)組合建議考慮同一反應(yīng)體系內(nèi)常見不同耐藥突變位點(diǎn)混合存在的情形，考察高濃度/高突變比例位點(diǎn)對(duì)低濃度/低突變位點(diǎn)檢測(cè)的影響。

2.8核酸提取/純化性能

核酸提取/純化步驟的目的除最大量分離出目標(biāo)DNA外，還有相應(yīng)的純化作用，應(yīng)盡可能去除PCR抑制物。糞便樣本類型對(duì)PCR抑制物的去除要求較高，在核酸提取試劑的選擇中應(yīng)關(guān)注。

研究確定核酸提取方法，闡述核酸提取原理，提交提取方案選擇研究資料。無論申報(bào)產(chǎn)品是否含有DNA分離/純化的組分，注冊(cè)申請(qǐng)人都應(yīng)對(duì)配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究。若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測(cè)試劑進(jìn)行抗干擾、再現(xiàn)性和檢出限的驗(yàn)證。如果配套核酸提取試劑提取原理存在差異，還需額外進(jìn)行檢出限的建立研究。

2.10反應(yīng)體系

2.10.1樣本采集和處理

2.10.1.1詳述樣本采集部位、采集方式、樣本采集量的選擇，提供相關(guān)的研究資料。包括對(duì)樣本的收集、制備或處理、運(yùn)輸（如涉及）和儲(chǔ)存的方式進(jìn)行驗(yàn)證，必要時(shí)進(jìn)行選擇和確認(rèn)并提供相關(guān)的研究資料。不同類型的樣本應(yīng)分別進(jìn)行研究。參考布里斯托（Bristol）大便分類法，糞便樣本建議關(guān)注對(duì)不同類型糞便的研究，如有不適合樣本（如水樣便）應(yīng)在說明書明確。胃黏膜組織樣本建議關(guān)注采樣位點(diǎn)位置（如幽門胃竇/胃體）、數(shù)量等。

2.10.1.2樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇：是否受病程、臨床癥狀、用藥情況、用藥間隔等因素的影響。

2.10.1.3樣本處理方式的選擇：研究樣本適用的保存和處理方式，包括樣本用量、糞便沉淀/離心處理、組織研磨、蛋白酶消解等。

2.10.2核酸提取和反應(yīng)體系

研究確定最佳核酸提取和反應(yīng)體系，包括核酸提取用的樣本體積、洗脫體積、PCR反應(yīng)加樣體積及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。

提交不同適用機(jī)型基線和閾值循環(huán)數(shù)的確定資料。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

3.穩(wěn)定性研究資料

申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。對(duì)于開瓶穩(wěn)定性研究應(yīng)模擬真實(shí)使用情形，包括開瓶穩(wěn)定性的開瓶頻次和開瓶時(shí)間等。

4.陽性判斷值研究資料

陽性判斷值研究樣本來源應(yīng)為預(yù)期人群，并考慮不同性別、年齡、地域等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性，盡量納入較多弱陽性的樣本，以及一定數(shù)量的其他容易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的樣本。申報(bào)產(chǎn)品如區(qū)分突變類型，應(yīng)對(duì)不同突變位點(diǎn)應(yīng)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。建議申請(qǐng)人采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式確定申報(bào)試劑陽性判斷值，亦可采用其他科學(xué)合理的方法進(jìn)行研究。如判定值存在灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。如產(chǎn)品設(shè)計(jì)了內(nèi)控基因用于質(zhì)控幽門螺桿菌感染，也應(yīng)提交內(nèi)控基因陽性判斷值研究。

提交陽性判斷值建立及驗(yàn)證研究資料時(shí)，應(yīng)包括研究方案、設(shè)定評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、研究過程以及研究原始數(shù)據(jù)等。其中所用樣本的背景信息列表，至少包括性別、年齡、樣本類型、臨床診斷信息、樣本來源機(jī)構(gòu)、檢測(cè)結(jié)果等信息。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類型，應(yīng)對(duì)各樣本類型進(jìn)行陽性判斷值的驗(yàn)證。

提供內(nèi)標(biāo)檢測(cè)結(jié)果范圍的確定方法和研究資料。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、企業(yè)參考品、質(zhì)控品等。應(yīng)提供主要原材料的來源與選擇、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗(yàn)資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)的制備、鑒定和質(zhì)量控制過程，制備工藝應(yīng)相對(duì)穩(wěn)定；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比篩選試驗(yàn)資料、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的入廠檢驗(yàn)報(bào)告。生產(chǎn)商應(yīng)固定，不得隨意更換。

5.1.1引物和探針

應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，包括對(duì)包容性和特異性的考慮情況，提供引物、探針核酸序列、靶序列的基因位點(diǎn)及兩者的對(duì)應(yīng)情況。產(chǎn)品的內(nèi)控基因的引物探針建議針對(duì)幽門螺桿菌保守核酸序列設(shè)計(jì)。建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選，通過序列比對(duì)和功能性試驗(yàn)等方式，對(duì)產(chǎn)品檢出限、包容性和特異性進(jìn)行評(píng)價(jià)。通過篩選確定最佳的引物和探針組合。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度、探針標(biāo)記的熒光素及功能性試驗(yàn)等。

5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP，應(yīng)提交對(duì)其純度、濃度、功能性試驗(yàn)等的驗(yàn)證資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.4酶

需要的酶主要包括DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶（如有）等，應(yīng)分別對(duì)酶活性、熱穩(wěn)定性、功能性等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。

5.1.4質(zhì)控品

試劑盒一般包含陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品。陽性質(zhì)控品應(yīng)包含試劑盒檢測(cè)的靶序列，可采用質(zhì)粒等制備。如產(chǎn)品設(shè)置應(yīng)用于陽性判斷值判斷的野生型陽性質(zhì)控品，應(yīng)考慮靶標(biāo)序列的完整性。質(zhì)控品需參與樣本處理、核酸的平行提取和檢測(cè)的全過程，以對(duì)整個(gè)提取和PCR擴(kuò)增過程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。提交試劑盒質(zhì)控品有關(guān)原料選擇、制備、定值過程、濃度范圍等試驗(yàn)資料，對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果Ct值范圍做出明確的要求。

5.1.5內(nèi)標(biāo)

內(nèi)標(biāo)，又稱內(nèi)對(duì)照，可對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)與靶核酸一同提取及擴(kuò)增。申請(qǐng)人需對(duì)內(nèi)標(biāo)的引物、探針設(shè)計(jì)和相關(guān)反應(yīng)體系的濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽性曲線又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制。明確內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果Ct值范圍。建議科學(xué)設(shè)置內(nèi)標(biāo)，對(duì)待測(cè)樣本的取樣質(zhì)量、試劑的反應(yīng)體系進(jìn)行監(jiān)控。

5.1.6企業(yè)參考品

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和精密度參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際需要設(shè)置企業(yè)參考品。 

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、耐藥位點(diǎn)及突變比例、濃度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品應(yīng)采用臨床樣本，或者使用培養(yǎng)菌株加入陰性基質(zhì)。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

陽性參考品：應(yīng)設(shè)置不同的濃度水平，并應(yīng)包括申報(bào)產(chǎn)品聲稱可檢測(cè)的突變位點(diǎn)。

陰性參考品：主要涉及對(duì)交叉反應(yīng)的驗(yàn)證情況，納入陰性臨床樣本、野生型幽門螺桿菌、空腸彎曲菌、檢測(cè)范圍外的其他耐藥突變位點(diǎn)。

檢出限參考品：可采用95%陽性檢出水平或略高于檢出限的水平（應(yīng)明確幽門螺桿菌核酸濃度和耐藥突變比例）。包含所有的耐藥突變位點(diǎn)，可采用待測(cè)幽門螺桿菌耐藥基因突變陽性培養(yǎng)菌株和野生幽門螺桿菌培養(yǎng)菌株進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐渲啤?/span>

精密度參考品：精密度參考品應(yīng)包含申報(bào)產(chǎn)品聲稱的主要耐藥突變位點(diǎn)，試劑盒包含不同反應(yīng)體系時(shí)，精密度參考品應(yīng)至少包含每個(gè)反應(yīng)體系的代表性位點(diǎn)。至少包括弱陽性（低濃度突變）水平。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

生產(chǎn)工藝研究資料主要包括工作液配制（引物、探針濃度、酶濃度、dNTP濃度、緩沖液離子濃度等）、分裝和凍干（如有）、熒光標(biāo)記等工藝過程的描述及確定依據(jù)。生產(chǎn)過程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，可采用流程圖方式描述生產(chǎn)工藝，標(biāo)明關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

2.臨床試驗(yàn)方法

2.1與對(duì)比方法的比較研究

2.1.1對(duì)于已有同類產(chǎn)品上市的，臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇已上市的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品的一致性，評(píng)價(jià)內(nèi)容應(yīng)包括耐藥基因及位點(diǎn)的檢測(cè)和相關(guān)內(nèi)控基因的檢測(cè)。對(duì)比試劑的選擇應(yīng)考慮檢測(cè)的耐藥基因及突變位點(diǎn)范圍、適用的樣本類型、產(chǎn)品性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)體外診斷試劑具有良好的可比性，選擇已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行臨床試驗(yàn)時(shí)，對(duì)比試劑配套使用的核酸提取試劑應(yīng)滿足其說明書要求。

對(duì)比方法建議選擇能夠區(qū)分不同基因及不同突變位點(diǎn)的產(chǎn)品。如臨床試驗(yàn)選擇不區(qū)分突變位點(diǎn)的產(chǎn)品作為對(duì)比產(chǎn)品，臨床試驗(yàn)還應(yīng)針對(duì)對(duì)比方法檢測(cè)陽性病例采用合適的方法確認(rèn)突變類型。

2.1.2對(duì)于尚無同類產(chǎn)品上市的，申請(qǐng)人可采用試驗(yàn)體外診斷試劑與核酸序列測(cè)定（如Sanger測(cè)序等）方法進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，評(píng)價(jià)兩種檢測(cè)方法的一致性，評(píng)價(jià)內(nèi)容應(yīng)包括耐藥基因及位點(diǎn)的檢測(cè)和相關(guān)內(nèi)控基因的檢測(cè)。

臨床試驗(yàn)資料中應(yīng)對(duì)測(cè)序方法進(jìn)行詳細(xì)的介紹，針對(duì)測(cè)序過程的引物設(shè)計(jì)應(yīng)提供依據(jù)。明確檢測(cè)過程中配套使用的核酸提取試劑，針對(duì)測(cè)序方法提交性能驗(yàn)證數(shù)據(jù)，證明測(cè)序方法與試驗(yàn)體外診斷試劑的可比性。如測(cè)序試驗(yàn)委托其他機(jī)構(gòu)完成，還應(yīng)提交由臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)委托第三方機(jī)構(gòu)/實(shí)驗(yàn)室開展相關(guān)試驗(yàn)的測(cè)序服務(wù)合同/協(xié)議。

2.2與藥敏試驗(yàn)的比較研究

在上述比較研究的基礎(chǔ)上，為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)產(chǎn)品臨床性能，臨床試驗(yàn)還應(yīng)采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與幽門螺桿菌體外藥敏試驗(yàn)（如E-test試驗(yàn)等）進(jìn)行比較研究。臨床試驗(yàn)過程中選擇的微生物藥敏檢測(cè)試劑抗生素應(yīng)與產(chǎn)品說明書預(yù)期用途中明確的抗生素一致。

3.臨床試驗(yàn)受試人群的選擇

臨床試驗(yàn)的受試人群應(yīng)來自產(chǎn)品的預(yù)期適用人群，基于產(chǎn)品預(yù)期用途，臨床試驗(yàn)入組人群應(yīng)為已確診為幽門螺桿菌感染的病例。幽門螺桿菌感染的確診可以為尿素呼氣試驗(yàn)（UBT）、已上市幽門螺桿菌核酸或抗原檢測(cè)試劑、組織學(xué)檢測(cè)等。

針對(duì)2.1與對(duì)比方法的比較研究(耐藥基因檢測(cè)與已上市同類產(chǎn)品和/或核酸序列測(cè)定方法的比對(duì)研究)，因入組病例在治療前及治療后病原體載量及耐藥情況可能存在差異，為了充分評(píng)價(jià)產(chǎn)品性能，建議臨床試驗(yàn)針對(duì)治療前和治療后的病例均有一定數(shù)量的入組。

針對(duì)該類產(chǎn)品特點(diǎn)，產(chǎn)品在設(shè)計(jì)過程中包括內(nèi)控基因。為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)內(nèi)控基因的性能，臨床試驗(yàn)需開展內(nèi)控基因與已上市同類產(chǎn)品或核酸序列測(cè)定方法的比對(duì)，該部分研究入組人群應(yīng)為疑似幽門螺桿菌感染的病例。

臨床試驗(yàn)應(yīng)針對(duì)耐藥基因入組一定數(shù)量的弱陽性病例。

4.臨床試驗(yàn)樣本類型

幽門螺桿菌耐藥基因檢測(cè)可能涉及的樣本類型包括胃粘膜組織、糞便等。臨床樣本的采集建議按照國(guó)家衛(wèi)健委發(fā)布的相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案執(zhí)行。對(duì)于胃黏膜組織，如臨床前性能研究確認(rèn)新鮮胃黏膜組織和凍存胃黏膜組織之間不存在差異，則臨床試驗(yàn)可以匯總統(tǒng)計(jì)或以其中一種開展。

如申報(bào)產(chǎn)品適用于不同的樣本類型，例如胃粘膜組織、糞便等，應(yīng)針對(duì)不同樣本類型分別進(jìn)行臨床性能評(píng)價(jià)，包括分別進(jìn)行樣本量的估算等。

5.臨床試驗(yàn)樣本量

建議采用單組目標(biāo)值法公式進(jìn)行樣本量估算，臨床試驗(yàn)陽性樣本和陰性樣本數(shù)量應(yīng)分別滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

5.1針對(duì)與已上市同類產(chǎn)品或核酸序列測(cè)定方法的對(duì)比試驗(yàn)，可采用單組目標(biāo)值法公式分別估算每個(gè)抗生素耐藥基因的最低陽性和陰性樣本例數(shù)。

樣本量估算公式如下，

公式中，n為樣本量；Z_1-α/2、Z_1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P₀為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，P_T為申報(bào)產(chǎn)品評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

其中陽性符合率和陰性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P₀）建議不低于90%。臨床試驗(yàn)結(jié)果中，相關(guān)評(píng)價(jià)指標(biāo)的95%置信區(qū)間下限應(yīng)不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)評(píng)價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，如精確概率法等。

臨床試驗(yàn)中，針對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)范圍內(nèi)的每種突變位點(diǎn)均應(yīng)具有一定的陽性例數(shù)。針對(duì)臨床常見的各突變位點(diǎn)分別不低于70例。針對(duì)臨床試驗(yàn)過程中較難收集的突變位點(diǎn)，病例數(shù)不少于30例。

5.2針對(duì)與藥敏試驗(yàn)的對(duì)比試驗(yàn)，可采用單組目標(biāo)值法公式分別估算每個(gè)抗生素的最低耐藥和敏感樣本例數(shù)。其中靈敏度和特異度的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P₀）的設(shè)置應(yīng)滿足臨床使用需求。

5.3針對(duì)內(nèi)控基因與已上市同類產(chǎn)品或核酸序列測(cè)定方法的對(duì)比試驗(yàn)，可采用單組目標(biāo)值法公式分別估算最低陽性和陰性樣本例數(shù)。其中陽性符合率和陰性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P₀）的設(shè)置應(yīng)滿足臨床使用需求。

6.臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析

臨床試驗(yàn)結(jié)果一般以四格表的形式進(jìn)行總結(jié)，并據(jù)此計(jì)算試驗(yàn)體外診斷試劑的靈敏度和特異度，或與對(duì)比方法的陽性/陰性符合率及其95%置信區(qū)間。

臨床試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)對(duì)入組受試者的基本情況進(jìn)行分析，包括受試者年齡、性別的分布情況，以及臨床診斷背景、既往治療情況等。特別應(yīng)針對(duì)用于特異性評(píng)價(jià)的各類受試者進(jìn)行歸類匯總，確認(rèn)入組樣本具有較好的代表性。臨床試驗(yàn)中如涉及不同樣本類型，應(yīng)針對(duì)每種樣本類型分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

臨床試驗(yàn)應(yīng)針對(duì)經(jīng)治療及未經(jīng)治療的病例進(jìn)行亞組分析，產(chǎn)在兩個(gè)亞組中的性能應(yīng)滿足臨床要求。

臨床試驗(yàn)中所有不一致結(jié)果均應(yīng)結(jié)合患者的臨床癥狀、臨床診斷以及疾病治療、轉(zhuǎn)歸等信息進(jìn)行充分的分析。臨床試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)能夠證明產(chǎn)品臨床性能滿足臨床要求。

7.境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的認(rèn)可

境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)符合《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》和《使用體外診斷試劑境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的注冊(cè)審查指導(dǎo)原則》的相關(guān)要求。提交完整的臨床試驗(yàn)方案、報(bào)告和倫理審查意見，以及該數(shù)據(jù)適用于中國(guó)患者人群的論證資料、境內(nèi)外臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理差異的對(duì)比資料和臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理差異對(duì)于臨床試驗(yàn)結(jié)果影響的論證資料。

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)上述臨床試驗(yàn)技術(shù)審評(píng)要求，論證境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的充分性。

8.臨床證據(jù)的形式要求

申請(qǐng)人應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等法規(guī)文件要求提交各機(jī)構(gòu)倫理審查意見、臨床試驗(yàn)方案、臨床試驗(yàn)小結(jié)、臨床試驗(yàn)報(bào)告以及臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)庫(kù)。

臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)匯總表中應(yīng)提供病例的臨床診斷結(jié)果及支持病例臨床診斷結(jié)果的信息。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

幽門螺桿菌耐藥基因突變檢測(cè)試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】

1.1試劑盒用于體外定性檢測(cè)已確診為幽門螺桿菌感染的患者XX樣本中的yy耐藥基因突變，可檢測(cè)的突變類型包括xx基因zz突變，本產(chǎn)品可/不區(qū)分具體突變類型。

1.2 試劑盒用于XXX（抗生素）耐藥的臨床輔助診斷，為臨床醫(yī)生評(píng)估個(gè)體中幽門螺桿菌的耐藥性提供參考。

1.3適用人群：已確診為幽門螺桿菌感染的患者。

1.4簡(jiǎn)要介紹幽門螺桿菌耐藥基因突變位點(diǎn)的特征，包括突變位點(diǎn)的描述，所檢測(cè)的耐藥突變位點(diǎn)與相應(yīng)藥物的相關(guān)性。

1.5強(qiáng)調(diào)該試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為治療藥物調(diào)整的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等因素對(duì)患者治療進(jìn)行綜合判斷。

2.【檢驗(yàn)原理】

簡(jiǎn)述核酸提取純化及試劑盒檢測(cè)原理，說明檢測(cè)的耐藥突變位點(diǎn)信息，明確內(nèi)標(biāo)基因名稱及其作用。如采用了防污染措施，進(jìn)行簡(jiǎn)要描述。如可進(jìn)行幽門螺桿菌陰陽性判定，應(yīng)對(duì)其原理簡(jiǎn)要描述。

3.【主要組成成分】

明確試劑盒中各組分及具體成分，明確需要但未提供的材料，如核酸提取試劑、樣本保存液及其他配套使用的材料的產(chǎn)品名稱、生產(chǎn)廠家、貨號(hào)及注冊(cè)證號(hào)或備案號(hào)等信息。

4.【樣本要求】

明確樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇，是否受臨床癥狀、用藥情況、用藥間隔等因素的影響等。

詳細(xì)描述樣本采集、保存、運(yùn)輸和處理方式，包括采樣步驟，采樣量，保存液使用體積等。如有臨床公認(rèn)推薦的采樣要求，應(yīng)遵循，并引用相應(yīng)的技術(shù)規(guī)范或指南。描述樣本及核酸提取液的保存穩(wěn)定性。

5.【檢驗(yàn)方法】

明確核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR加樣體積，陰陽性質(zhì)控品與待測(cè)樣本同步進(jìn)行核酸提取操作。明確各適用機(jī)型的反應(yīng)參數(shù)設(shè)置，基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法，以及各檢測(cè)靶標(biāo)對(duì)應(yīng)的熒光通道。明確內(nèi)標(biāo)、質(zhì)控的檢測(cè)結(jié)果Ct值范圍。

6.【陽性判斷值】

簡(jiǎn)述陽性判斷值確定的方法，包括研究人群特征、研究樣本量和統(tǒng)計(jì)分析方法等。

7.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

通過擴(kuò)增曲線和Ct值進(jìn)行結(jié)果陰陽性的判斷，列明結(jié)果陰性、陽性、灰區(qū)、復(fù)測(cè)、無效等所有情形。

8.【檢驗(yàn)方法局限性】

8.1本試劑檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

8.2 本產(chǎn)品僅檢測(cè)靶標(biāo)區(qū)域內(nèi)突變引起的耐藥。由其他基因或基因區(qū)域的突變、以及其他耐藥機(jī)制引起的耐藥本產(chǎn)品不能檢出。

8.3導(dǎo)致假陰性/假陽性結(jié)果的可能性分析：

8.3.1不合理的樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存條件，樣本中目標(biāo)物濃度過低。

8.3.2 待測(cè)目標(biāo)基因序列的變異或其他原因?qū)е碌男蛄懈淖儭?/span>

8.3.3耐藥基因型與表型存在一定的不一致性。

8.3.4未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾，如內(nèi)源性或外源引入樣本的物質(zhì)。

8.3.5是否受用藥影響，明確與根除治療或其他經(jīng)驗(yàn)用藥的時(shí)間間隔。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

簡(jiǎn)述試劑性能指標(biāo)和研究情況，建議包含：參考品的符合性、準(zhǔn)確性、檢出限、包容性、精密度、分析特異性、臨床試驗(yàn)等。

10.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

10.1試劑保存運(yùn)輸及使用過程中多種因素可能導(dǎo)致性能變化，如保存運(yùn)輸不當(dāng)、樣本采集、樣本處理及檢測(cè)過程操作不規(guī)范等，請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書操作。

10.2生物安全防護(hù)相關(guān)內(nèi)容

10.3避免實(shí)驗(yàn)室污染的措施

    三、參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局. 關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告: 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第122號(hào)[Z].

[2] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則（2023年修訂版）: 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心公告2024年第1號(hào)[Z].

[3] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心.定性檢測(cè)試劑分析性能評(píng)估注冊(cè)審查指導(dǎo)原則: 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心公告2022年第36號(hào)[Z].

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)幽門螺桿菌學(xué)組. 2022中國(guó)幽門螺桿菌感染治療指南[J].中華消化雜志,2022,42(11):745-756. 

[5] Malfertheiner P, Megraud F, Rokkas T, et al. Management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht VI/Florence consensus report. Gut 2022; 71:1724–1762.

[6] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)早診早治學(xué)組. 胃癌早診早治中國(guó)專家共識(shí)（2023版)[J]. 中華消化外科雜志, 2024, 23(1): 23-36.

來源：CMDE

原文下載：幽門螺桿菌耐藥基因突變檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（征求意見稿) .docx